Mal ətində bağırsaq bakteriyalarının aşkarlanması üçün yeni PCR üsulu

Kəsim və sonrakı emal zamanı Escherichia (E.) coli, Salmonella, Shigella və Citrobacter kimi bağırsaq bakteriyalarının patogen ştammları mal əti kimi məhsullara çata bilər. Qida təhlükəsizliyini təmin etmək üçün patogen, eyni zamanda xarab olan bakteriyaların sürətli və praktiki aşkarlama üsulları lazımdır.

Polimeraza zəncirvari reaksiya (PZR) istifadə edərək aşkarlama bunun üçün uyğun, spesifik və həssas üsul kimi görünür. Bununla belə, hazırda fərdi mikroblar üçün yalnız PCR üsulları mövcuddur. Əvvəlki tədqiqatlar Salmonella, E. coli, Shigella və Citrobacter növlərində ümumi homoloji DNT ardıcıllığını (phoP) təsvir etdi və PCR analizində bu dörd növü aşkar edən primerlər hazırladı. Sonrakı işdə, LI və MUSTAPHA yuxarıda qeyd olunan dörd növ üçün bu phoP primerlərinin spesifikliyini araşdırdılar (Y. LI, A. MUSTAPHA: Kıyılmış mal ətində bağırsaq bakteriyalarını aşkar etmək üçün polimeraza zəncirvari reaksiya analizinin işlənməsi. PZR metodunun inkişafı mal ətində bağırsaq bakteriyalarının aşkarlanması).

Həssaslıq 4 növlə yoxlanılıb: E. coli O157:H7, S. Typhimurium, Shigella flexneri və Citrobacter freundii-nin hər bir ştammından hüceyrə qatılmaları hazırlanmışdır. Bakterial süspansiyonların proteinaz K həzmindən, qaynadılmasından və sentrifuqasından sonra phoP primerləri ilə PCR aparılmışdır. Həssaslıq ən aşağı seyreltmə səviyyələrini aşkar etmək üçün lazım olan ən qısa zənginləşdirmə müddətindən istifadə etməklə bu 4 növün hər biri üçün müəyyən edilmişdir.

Bundan əlavə, mal əti nümunələri dörd patogenlə süni şəkildə çirklənmişdir. Spesifikliyi yoxlamaq üçün 70 müxtəlif suşlardan istifadə edilmişdir. Buraya, həmçinin, listeria, yersinia, bifidobakteriyalar, enterokoklar, proteus, mikrokoklar və s. kimi qida ilə əlaqəli 48 digər növ daxildir. 302 əsas cütün axtarılan PCR məhsulu yalnız E. coli növünün ştammlarında və ya Salmonella, Shigella və Citrobacter cinsinin ştammlarında aşkar edilə bilər. Bu növlərə/cinslərə aid olmayan tədqiq edilmiş digər suşlarda PCR reaksiyası mənfi olmuşdur.

Bakterial suspenziyalarda aşkarlama limiti E. coli O900:H157 üçün 7 hüceyrə, S. Typhimurium üçün 10 hüceyrə, Shigella flexneri üçün 950 hüceyrə və Citrobacter freundii üçün 140 hüceyrə olmuşdur. Bu PCR üsulu ilə bu 4 patogenin hər birinin bir koloniya əmələ gətirən vahidi (CFU) 10 saat zənginləşdirmədən sonra süni şəkildə çirklənmiş mal ətində bərpa edilə bilər. Kultura üsulları ilə birlikdə bu PCR üsulu mal ətində E. coli, Citrobacter, Salmonella və Shigella aşkarlanması üçün uyğundur. Bununla belə, bu dörd qida yoluxucu patogenləri fərqləndirmək üçün əlavə tədqiqatlar lazımdır.

Mənbə: Kulmbach [ PICHNER ]