Нов PCR метод за откриване на чревни бактерии в говеждо месо

По време на клане и последваща обработка, патогенни щамове на чревни бактерии като Escherichia (E.) coli, Salmonella, Shigella и Citrobacter могат да достигнат до продукти като говеждо месо. За да се гарантира безопасността на храните, са необходими бързи и практични методи за откриване на патогенни, но и причиняващи разваляне бактерии.

Откриването чрез полимеразна верижна реакция (PCR) изглежда подходящ, специфичен и чувствителен метод за това. Понастоящем обаче са налични само PCR методи за отделни микроби. Предишни проучвания описаха обща хомоложна ДНК последователност (phoP) в Salmonella, E. coli, Shigella и Citrobacter видове и разработиха праймери, които откриха тези четири вида в PCR анализ. В по-нататъшна работа LI и MUSTAPHA изследваха специфичността на тези phoP праймери за четирите вида, споменати по-горе (Y. LI, A. MUSTAPHA: Разработване на анализ на полимеразна верижна реакция за откриване на чревни бактерии в смляно говеждо месо. Разработване на PCR метод за откриване на чревни бактерии в говеждо месо).

Чувствителността беше проверена с 4-те вида: бяха приготвени клетъчни разреждания от всеки щам на Е. coli O157:H7, S. Typhimurium, Shigella flexneri и Citrobacter freundii. След смилане с протеиназа К, кипене и центрофугиране на бактериалните суспензии, PCR се провежда с phoP праймери. Чувствителността се определя за всеки от тези 4 вида, като се използва най-краткото време за обогатяване, необходимо за откриване на най-ниските нива на разреждане.

Освен това пробите от говеждо месо бяха изкуствено заразени с четирите патогена. За тестване на специфичността са използвани 70 различни щама. Това включва и 48 други вида, свързани с храните, като листерия, йерсиния, бифидобактерии, ентерококи, протей, микрококи и други. . Търсеният PCR продукт от 302 базови двойки може да бъде открит само в щамове от вида E. coli или щамове от род Salmonella, Shigella и Citrobacter. При другите изследвани щамове, които не принадлежат към тези видове/родове, PCR реакцията е отрицателна.

Границата на откриване в бактериалните суспензии е 900 клетки за E. coli O157:H7, 10 клетки за S. Typhimurium, 950 клетки за Shigella flexneri и 140 клетки за Citrobacter freundii. С този PCR метод, една образуваща колония единица (CFU) от всеки от тези 4 патогена може да бъде възстановена в изкуствено замърсено говеждо месо след 10 часа обогатяване. Заедно с методите за култивиране, този PCR метод е подходящ за откриване на Е. coli, Citrobacter, Salmonella и Shigella в говеждо месо. Необходими са обаче допълнителни изследвания, за да се разграничат тези четири хранителни патогена.

Източник: Kulmbach [ PICHNER ]