طريقة PCR جديدة للكشف عن البكتيريا المعوية في لحوم الأبقار

أثناء الذبح والمعالجة اللاحقة، يمكن أن تصل السلالات المسببة للأمراض من البكتيريا المعوية مثل الإشريكية القولونية والسالمونيلا والشيجلا والبكتيريا الليمونية إلى منتجات مثل لحم البقر. ولضمان سلامة الأغذية، من الضروري استخدام طرق سريعة وعملية للكشف عن البكتيريا المسببة للأمراض وكذلك البكتيريا المسببة للتلف.

يبدو أن الكشف باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) هو طريقة مناسبة ومحددة وحساسة لهذا الغرض. ومع ذلك، فإن طرق تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) هي الوحيدة المتوفرة حاليًا للجراثيم الفردية. وصفت الدراسات السابقة تسلسل الحمض النووي المتماثل الشائع (phoP) في أنواع السالمونيلا، والإشريكية القولونية، والشيجلا، والسيتروباكتر، وطورت الاشعال التي اكتشفت هذه الأنواع الأربعة في اختبار PCR. في مزيد من العمل، قام لي ومصطفى بالتحقيق في خصوصية هذه البادئات phoP للأنواع الأربعة المذكورة أعلاه (Y. LI، A. MUSTAPHA: تطوير مقايسة تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف عن البكتيريا المعوية في اللحم المفروم. تطوير طريقة PCR لـ الكشف عن البكتيريا المعوية في لحوم البقر).

تم فحص الحساسية مع الأنواع الأربعة: تم تحضير التخفيفات الخلوية من سلالة واحدة من كل من E. coli O4: H157 وS. Typhimurium وShigella flexneri وCitrobacter freundii. بعد هضم بروتيناز K، والغليان والطرد المركزي للمعلقات البكتيرية، تم إجراء PCR باستخدام الاشعال phoP. تم تحديد الحساسية لكل نوع من هذه الأنواع الأربعة باستخدام أقصر وقت للتخصيب اللازم للكشف عن أدنى مستويات التخفيف.

علاوة على ذلك، تم تلوث عينات لحوم البقر بشكل مصطنع بمسببات الأمراض الأربعة. لاختبار الخصوصية، تم استخدام 70 سلالة مختلفة. وشمل ذلك أيضًا 48 نوعًا آخر ذي صلة بالغذاء مثل الليستيريا واليرسينيا والبكتريا المشقوقة والمكورات المعوية والمتقلبة والمكورات الدقيقة وغيرها. . لا يمكن اكتشاف منتج PCR المطلوب المكون من 302 زوجًا أساسيًا إلا في سلالات الأنواع E. coli أو سلالات جنس Salmonella وShigella وCitrobacter. وفي السلالات الأخرى التي تم فحصها والتي لا تنتمي إلى هذه الأنواع/الأجناس، كان تفاعل PCR سلبيًا.

كان حد الكشف في المعلقات البكتيرية هو 900 خلية لبكتيريا E. coli O157:H7، و10 خلايا لبكتيريا S. Typhimurium، و950 خلية لبكتيريا Shigella flexneri و140 خلية لبكتيريا Citrobacter freundii. باستخدام طريقة PCR هذه، يمكن استعادة وحدة تشكيل مستعمرة واحدة (CFU) من كل من مسببات الأمراض الأربعة هذه في لحم البقر الملوث صناعيًا بعد 4 ساعات من التخصيب. تعد طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل هذه، جنبًا إلى جنب مع طرق الاستزراع، مناسبة للكشف عن بكتيريا الإشريكية القولونية والبكتيريا الليمونية والسالمونيلا والشيغيلا في لحم البقر. ومع ذلك، من الضروري إجراء مزيد من التحقيقات للتمييز بين مسببات الأمراض الأربعة المنقولة بالغذاء.

المصدر: كولمباخ [PICHNER]