Nova PCR metoda za detekciju crijevnih bakterija u govedini

Tijekom klanja i naknadne obrade, patogeni sojevi crijevnih bakterija kao što su Escherichia (E.) coli, Salmonella, Shigella i Citrobacter mogu dospjeti na proizvode kao što je govedina. Brze i praktične metode otkrivanja patogenih bakterija, kao i bakterija koje uzrokuju kvarenje, stoga su neophodne kako bi se osigurala sigurnost hrane.

Detekcija pomoću lančane reakcije polimeraze (PCR) čini se prikladnom, specifičnom i osjetljivom metodom za to. Trenutno su, međutim, dostupne samo PCR metode za pojedinačne klice. U prethodnim studijama, zajednička homologna DNA sekvenca (phoP) opisana je u vrstama Salmonella, E. coli, Shigella i Citrobacter te su razvijeni primeri koji su otkrili ove četiri vrste u PCR testu. U daljnjem radu, LI i MUSTAPHA istraživali su specifičnost ovih phoP početnica za 4 upravo spomenute vrste (Y. LI, A. MUSTAPHA: Razvoj testa lančane reakcije polimeraze za otkrivanje crijevnih bakterija u mljevenoj govedini. Razvoj PCR metode za detekciju crijevnih bakterija u govedini).

Osjetljivost je provjerena s 4 vrste: stanična razrjeđenja pripremljena su iz po jednog soja E. coli O157:H7, S. Typhimurium, Shigella flexneri i Citrobacter freundii. Nakon digestije proteinazom K, kuhanja i centrifugiranja bakterijskih suspenzija, PCR je proveden s phoP početnicama. Osjetljivost je određena za svaku od ove 4 vrste korištenjem najkraćeg vremena obogaćivanja potrebnog za otkrivanje najnižih razina razrjeđenja.

Nadalje, uzorci govedine bili su umjetno kontaminirani s četiri patogena. Za ispitivanje specifičnosti korišteno je 70 različitih sojeva. Ovo također uključuje 48 drugih vrsta važnih za hranu kao što su listerija, jersinija, bifidobakterije, enterokoki, proteus, mikrokoki itd. Traženi PCR produkt od 302 para baza mogao se dokazati samo u sojevima vrste E. coli ili sojevima roda Salmonella, Shigella i Citrobacter. Kod ostalih ispitivanih sojeva koji nisu pripadali ovim vrstama/rodovima PCR reakcija je bila negativna.

Granica detekcije u bakterijskim suspenzijama bila je 900 stanica za E. coli O157:H7, 10 stanica za S. Typhimurium, 950 stanica za Shigella flexneri i 140 stanica za Citrobacter freundii. S ovom PCR metodom, jedna jedinica koja stvara kolonije (CFU) svakog od ova 4 patogena mogla se pronaći u umjetno kontaminiranoj govedini nakon 10 sati obogaćivanja. Zajedno s metodama kulture, ova PCR metoda je prikladna za detekciju E. coli, Citrobacter, Salmonella i Shigella u govedini. Međutim, potrebna su daljnja istraživanja kako bi se napravila razlika između ova četiri patogena koja se prenose hranom.

Izvor: Kulmbach [ PICHNER ]