ახალი PCR მეთოდი საქონლის ხორცში ნაწლავის ბაქტერიების გამოსავლენად

დაკვლისა და შემდგომი დამუშავების დროს, ნაწლავის ბაქტერიების პათოგენურმა შტამებმა, როგორიცაა Escherichia (E.) coli, Salmonella, Shigella და Citrobacter, შეიძლება მიაღწიოს ისეთ პროდუქტებს, როგორიცაა საქონლის ხორცი. სურსათის უვნებლობის უზრუნველსაყოფად საჭიროა პათოგენური, მაგრამ ასევე გაფუჭების გამომწვევი ბაქტერიების სწრაფი და პრაქტიკული გამოვლენის მეთოდები.

პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის (PCR) გამოყენებით გამოვლენა, როგორც ჩანს, შესაფერისი, სპეციფიკური და მგრძნობიარე მეთოდია ამისთვის. თუმცა, ამჟამად მხოლოდ PCR მეთოდებია ხელმისაწვდომი ინდივიდუალური მიკრობებისთვის. წინა კვლევებში აღწერილი იყო საერთო ჰომოლოგიური დნმ-ის თანმიმდევრობა (phoP) Salmonella, E. coli, Shigella და Citrobacter სახეობებში და შეიმუშავეს პრაიმერები, რომლებმაც გამოავლინეს ეს ოთხი სახეობა PCR ანალიზში. შემდგომი მუშაობისას, LI და MUSTAPHA გამოიკვლიეს ამ phoP პრაიმერების სპეციფიკა ზემოთ ნახსენები ოთხი სახეობისთვის (Y. LI, A. MUSTAPHA: პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის ანალიზის განვითარება ნაწლავური ბაქტერიების აღმოსაჩენად საქონლის ხორცში. PCR მეთოდის შემუშავება საქონლის ხორცში ნაწლავის ბაქტერიების აღმოჩენა).

მგრძნობელობა შემოწმდა 4 სახეობით: უჯრედული განზავება მომზადდა E. coli O157:H7, S. Typhimurium, Shigella flexneri და Citrobacter freundii-ის თითო შტამისგან. პროტეინაზა K მონელების, ბაქტერიული სუსპენზიების დუღილისა და ცენტრიფუგაციის შემდეგ, PCR ჩატარდა phoP პრაიმერებით. მგრძნობელობა განისაზღვრა ამ 4 სახეობიდან თითოეულისთვის გამდიდრების უმოკლეს დროის გამოყენებით, რომელიც საჭიროა ყველაზე დაბალი განზავების დონის დასადგენად.

გარდა ამისა, ძროხის ნიმუშები ხელოვნურად იყო დაბინძურებული ოთხი პათოგენით. სპეციფიკურობის შესამოწმებლად გამოიყენეს 70 სხვადასხვა შტამი. ეს ასევე მოიცავდა 48 საკვებთან შესაბამის სახეობას, როგორიცაა ლისტერია, იერსინია, ბიფიდობაქტერია, ენტეროკოკები, პროტეუსი, მიკროკოკები და სხვა. . 302 ბაზის წყვილის მოძიებული PCR პროდუქტის აღმოჩენა შესაძლებელია მხოლოდ E. coli-ს სახეობის შტამებში ან Salmonella, Shigella და Citrobacter გვარის შტამებში. სხვა გამოკვლეულ შტამებში, რომლებიც არ მიეკუთვნებოდნენ ამ სახეობებს/გვარებს, PCR რეაქცია უარყოფითი იყო.

გამოვლენის ლიმიტი ბაქტერიულ სუსპენზიებში იყო 900 უჯრედი E. coli O157:H7, 10 უჯრედი S. Typhimurium-ისთვის, 950 უჯრედი Shigella flexneri-სთვის და 140 უჯრედი Citrobacter freundii-სთვის. ამ PCR მეთოდით, ამ 4 პათოგენიდან ერთი კოლონიის წარმომქმნელი ერთეული (CFU) შეიძლება აღდგეს ხელოვნურად დაბინძურებულ საქონლის ხორცში გამდიდრებიდან 10 საათის შემდეგ. კულტურის მეთოდებთან ერთად, ეს PCR მეთოდი შესაფერისია ძროხის ხორცში E. coli, Citrobacter, Salmonella და Shigella-ს გამოსავლენად. თუმცა, შემდგომი გამოკვლევები აუცილებელია ამ ოთხი საკვების გამომწვევი პათოგენის დიფერენცირების მიზნით.

წყარო: Kulmbach [PICHNER]