Bagong paraan ng PCR para sa pagtuklas ng bituka bacteria sa karne ng baka

Sa panahon ng pagpatay at kasunod na pagproseso, ang mga pathogenic strain ng bituka na bakterya tulad ng Escherichia (E.) coli, Salmonella, Shigella at Citrobacter ay maaaring umabot sa mga produkto tulad ng karne ng baka. Upang matiyak ang kaligtasan ng pagkain, kinakailangan ang mabilis at praktikal na mga pamamaraan ng pagtuklas para sa pathogenic ngunit pati na rin ang mga bacteria na nagdudulot ng pagkasira.

Ang pagtuklas gamit ang polymerase chain reaction (PCR) ay lumilitaw na isang angkop, partikular at sensitibong paraan para dito. Gayunpaman, ang mga pamamaraan ng PCR lamang ang kasalukuyang magagamit para sa mga indibidwal na mikrobyo. Inilarawan ng mga nakaraang pag-aaral ang isang karaniwang homologous DNA sequence (phoP) sa Salmonella, E. coli, Shigella, at Citrobacter species at bumuo ng mga primer na naka-detect sa apat na species na ito sa isang PCR assay. Sa karagdagang trabaho, sinisiyasat ng LI at MUSTAPHA ang pagiging tiyak ng mga primer na ito ng phoP para sa apat na species na binanggit sa itaas (Y. LI, A. MUSTAPHA: Pagbuo ng polymerase chain reaction assay upang makita ang enteric bacteria sa ground beef. Pagbuo ng isang PCR method para sa pagtuklas ng bituka bacteria sa karne ng baka).

Ang sensitivity ay sinuri gamit ang 4 na species: ang mga cell dilution ay inihanda mula sa isang strain bawat isa sa E. coli O157:H7, S. Typhimurium, Shigella flexneri at Citrobacter freundii. Pagkatapos ng panunaw ng proteinase K, pagkulo at sentripugasyon ng mga bacterial suspension, isinagawa ang PCR kasama ang mga primer ng phoP. Natukoy ang pagiging sensitibo para sa bawat isa sa 4 na species na ito gamit ang pinakamaikling oras ng pagpapayaman na kinakailangan upang makita ang pinakamababang antas ng pagbabanto.

Higit pa rito, ang mga sample ng karne ng baka ay artipisyal na kontaminado ng apat na pathogens. Upang subukan ang pagtitiyak, 70 iba't ibang mga strain ang ginamit. Kasama rin dito ang 48 iba pang species na may kaugnayan sa pagkain tulad ng listeria, yersinia, bifidobacteria, enterococci, proteus, micrococci, atbp. Ang hinahangad na produkto ng PCR na 302 base pairs ay makikita lamang sa mga strain ng species na E. coli o sa mga strain ng genus na Salmonella, Shigella at Citrobacter. Sa iba pang mga strain na sinuri na hindi kabilang sa mga species/genera na ito, negatibo ang reaksyon ng PCR.

Ang limitasyon sa pagtuklas sa mga bacterial suspension ay 900 cells para sa E. coli O157:H7, 10 cells para sa S. Typhimurium, 950 cells para sa Shigella flexneri at 140 cells para sa Citrobacter freundii. Sa pamamaraang ito ng PCR, ang isang colony-forming unit (CFU) ng bawat isa sa 4 na pathogen na ito ay maaaring makuha sa artipisyal na kontaminadong karne ng baka pagkatapos ng 10 oras na pagpapayaman. Kasama ng mga pamamaraan ng kultura, ang pamamaraang ito ng PCR ay angkop para sa pagtuklas ng E. coli, Citrobacter, Salmonella at Shigella sa karne ng baka. Gayunpaman, ang mga karagdagang pagsisiyasat ay kinakailangan upang makilala ang pagkakaiba sa pagitan ng apat na pathogen na dala ng pagkain.

Pinagmulan: Kulmbach [ PICHNER ]